(1)取小试管1支,先以普通吸管准确吸取红细胞稀释液4.0ml(按理应加 3.98ml)放于试管中[1分]。(2)稀释血液:用血红蛋白吸管准确吸取供检血液20微升,用干脱脂棉拭去管尖外壁附着的血液;然后将血红蛋白吸管插入已装稀释液的试管底部,缓缓放出血液;再吸取上清液反复洗净附在吸管内壁上的血液数次;立即振摇试管1~2min,使血液与稀释液充分混合,即得200倍的稀释血液[1分]。(3)充液:取清洁、干燥的计数板和血盖片。将血盖片紧密覆盖于血细胞计数板上;并将血细胞计数板置显微镜镜台上,用低倍镜先找到计数室;然后用小吸管取已摇匀的稀释血液一滴,使吸管尖端接触血盖片边缘和计数室空隙处,稀释的血液即可自然引入并充满计数室[1分]。(4)计数:计数室充液后,应静置1~2min,待红细胞分布均匀并下沉后开始计数。计数红细胞用高倍镜,一般计数中央大方格中四角4个及中央1个中方格(共 5 个中方格),即80个小方格内的红细胞数。5个中方格内红细胞的最高和最低数相差不得超过±10%,否则表示血液稀释、混合不均[1.5分]。红细胞在高倍镜下呈圆形,淡黄色,发亮。为避免重复和遗漏,计数时应按一定顺序进行。对于压在线上的红细胞,每格都只计入上方和左侧线上的,而压在下方和右侧线上的红细胞则均不计入[1分]。
注意事项:①加稀释液的数量或其浓度不准确[1分]。②错误地使用不适宜的血细胞稀释液[0.5分]。③吸血量不准确。④操作过慢,血液已形成不同程度的凝块或溶血,使计数减低[1分]。⑤血液与稀释液混合不均匀,致血细胞在计数室内分布不均匀[1分]。⑥计数室内充液过多或过少或有空泡[1分]。